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理工学科是什么

理工 理工是一个广大的领域包含物理、化学、生物、工程、天文、数学及前面六大类的各种运用与组合。理工事实上是自然、科学、和科技的容合。在西方世界里，理工这个字并不存在；理工在英文解释里，是自然(Science)与科技(Technology)的结合。理工二字最早是1880年代，由当时的中国留学生从国外的Science和Technology翻译合成的。时至今日，但凡有人提起世界理工大学之最，人人皆推麻省理工学院。麻省之名蜚声海外，成为世界各地莘莘学子心向神往，趋之若鹜的科学圣殿。 [编辑] 理工领域包含 物理-研究大自然现象及规律的学问 化学-研究物质的性质、组成、结构和变化的科学 生物-研究有生命的个体 工程-应用科学和技术的原理来解决人类问题 天文-观察及解释天体的物质状况及事件为主的学科 数学-研究量、结构、变化以及空间模型的学科;被誉为“科学的语言”

理工学科有哪些

教学上对物理
化学
数学
生物等学科的统称，这些学科的都与科学技术有着千丝万缕的连线，是从事科学研究的基础。
理工学科包括
数学
物理学
化学
生物学
天文学
心理学
地球科学
农业科学
环境学
生态学
工程技术科学
建筑学
......

里面有护理之类的专业吗

生物技术及应用专业
本专业是坚持科学发展观、坚持人与社会和谐发展的产物，极具前途。能培养学生在农林、医药、环保、生化、卫生防疫领域从事设计、生产、管理的能力，被称为新技术领域的管理精英和高级工程技术人员。课程安排
生物技术及应用专业开设的课程除公共课以外还有：基础生命科学、基础化学、生物化学、遗传学、微生物学、现代生物技术概论、细胞与分子生物学、免疫学、发酵工程、生物经济学，以及相关课程的实验实训课。
学院实施“2+1”教学模式：各专业学生在校学习二年，顶岗实习实践教学一年。学院与“专业教学指导委员会” 的十几家企业、科研单位共同组织教学工作，接纳学生顶岗实习。
为提高学生就业能力，教学计划中增加了职业资格证书或技术等级证书课。
学院新建和改建的8个实验实训室 拥有高速离心机、电子分析天平、紫外可见分光光度计等仪器设备， 承担基础生命科学实验、基础化学实验、生物化学实验、

保健养生专业
保健养生专业开设的课程除公共课以外还有：中医基础理论、中医诊断学、中药学、方剂学、经络学、腧穴学、解剖生理学、中医养生学、经穴保健、针法灸法、保健足疗、中医美容学、经络美容学、实用美容学、等课程。
中药学（国考）
食品营养与检验
医药营销 就业前景

随着生命科学和生物技术在社会各领域的发展渗透，生物经济将成为二十一世纪主流经济，学生就业前景十分看好。生物技术及应用专业学生可从事生物技术公司或科研单位的生产、检测、实验和生物技术产品的营销工作，还可以从事与生物技术相关的经济、行政管理、宣传咨询等方面的工作。近几年本学院毕业生就业率在96%以上。养生保健专
业学生可从事与中医药保健康复相关的营养咨询、老年保健、中医美容、保健按摩以及人体保健养生服务机构的工作。健康护理专业学生可在高级养老、社区护理、人体健康养生馆等服务机构从事专业健康护理、预防保健、护理管理、护理教育等工作。 以上是北京科技职业学院的生命科学学院。也就是护士医生等之类的。可以看一下。还不错 挺好的。

日常如何保健养生？

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化学中DSC测什么

DSC是差示扫描量热法，是一种热分析方法。可以测得相转变温度，相转变热焓，玻璃化转变温度等

请教上样缓冲液配方中DTT的用法

DTT是一种很强的还原剂，其还原性很大程度上是由于其氧化状态六元环（含二硫键）的构象稳定性。它的氧化还原电势在pH为7时为-0.33伏。
DTT的用途之一是作为巯基化DNA的还原剂和去保护剂。巯基化DNA末端硫原子在溶液中趋向于形成二聚体，特别是在存在氧气的情况下。这种二聚化大大降低了一些偶联反应实验（如DNA在生物感应器中的固定）的效率；而在DNA溶液中加入DTT，反应一段时间后除去，就可以降低DNA的二聚化。
DTT也常常被用于蛋白质中二硫键的还原，可用于阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键。但DTT往往无法还原包埋于蛋白质结构内部（溶剂不可及）的二硫键，这类二硫键的还原常常需要先将蛋白质变性（高温加热或加入变性剂，如6M盐酸胍、8M尿素或1%SDS）。反之，根据DTT存在情况下，二硫键还原速度的不同，可以判断其包埋程度的深浅。

DTT溶液怎么配 用于蛋白质凝胶电泳的上样buffer

1、1mol/lDDT溶液配制方法:用20ml 0.01mol/L乙酸钠溶液（pH5.2）溶解3.09g DTT，过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃。 　　
注意：DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理。
2、SDS-样品缓冲液：SDS100mg,巯基乙醇0.1ml,甘油1ml,溴酚蓝2mg,加入0.2mol/lpH7.2磷酸盐缓冲液0.5ml溶解；

寻， 6X蛋白电泳缓冲液配方，含DTT的。

称取7ml 4×Tris.Hcl/SDS（PH6.8），3 ml甘油，1g SDS，0.93g DTT，1.2mg溴酚兰，若需要，加去离子水至10ml

western blot蛋白含量测定时 上样缓冲液要含dtt吗

有含DTT的，也有含巯基还原剂的，看你个人需求。
4×蛋白上样缓冲液（含巯基还原剂）适用于SDS-PAGE(SDS变性聚丙烯酰胺凝胶电泳)时作蛋白质上样用。其主要成份为SDS，β-巯基乙醇，溴酚蓝，缓冲盐溶液等。
4×蛋白上样缓冲液（含DTT）适用于SDS-PAGE(SDS-变性聚丙烯酰胺凝胶电泳)时作蛋白质上样用。其主要成份为SDS，DTT，溴酚蓝，缓冲盐溶液等。

请教上样缓冲液配方中DTT的用法

不可以通用。 蛋白质上样缓冲液中的SDS和DTT分别可以屏蔽蛋白质电荷以及破坏二硫键，避免形成多聚体。 DNA上样缓冲液主要是起沉降和指示作用，不可用于蛋白，否则会影响蛋白相对分子量定量。 同样蛋白上样缓冲液中的tris-HCl浓度过高也会使溴酚蓝条带扭曲。

DTT在多大浓度下可以打开二硫键？

二硫键的打开关键是要有变性剂（6-8M 尿素），再在pH8--pH9条件下加入DTT(大于10mM)，室温作用4小时以上即可。当然，容器需要用封口膜密封。

DTT还原抗体的时候打开的是哪个二硫键

DTT 是二硫键的还原剂，还可以保持酶中-SH的还原态。
在PCR反应体系中加入二硫苏糖醇（DTT），可以打断二硫键，使染色体DNA结合的蛋白质从DNA上释放出来，导致更多的DNA与引物结合，提高扩增效率。
主要作用还是破坏蛋白质的稳定性。
DTT的作用是还原cys上被氧化的SH，也就是说可以把二硫桥拆开。
关于是否影响活性，因为一般的蛋白活性主要依靠三级结构，还原后的蛋白的三级结构被破坏了，所以活性也就丧失了。
DTT是还原剂主要破坏蛋白质的二硫键（分子内或分子间），一般来说它影响蛋白的构象，从而对蛋白的活性有影响，如果蛋白分子内无二硫键就不会影响结构或活性。
但是，有些蛋白（酶）只有在DTT或Cys存在时活性增加。
DTT为二硫苏糖醇，还原剂，可还原二硫键，对一些活性中心含有SH的酶有保护作用，防止活性中心SH的氧化。
同时在植物蛋白提取时加入，可防止植物体内酚类物质氧化对酶的影响。

哪些试剂可以打开蛋白质分子中的二硫键

二巯基乙醇
二硫苏糖醇
我就知道这二种，sds是破坏的氢键，打不开二硫键

怎么用SDS-PAGE确定二硫键是分子内还是分子间

你指的是亚基间还是亚基间吧？
最简单的办法是1个样品loading
buffer里加dtt，另一个不加dtt且不煮的sds-page，能看出点东西来。
如果没什么差异，二硫键是亚基内。
如果不加dtt那个样跑出来分子量比加的大，那二硫键是亚基间。

DTT是否既能激活一些酶又能使一些酶失活,为什么?

二硫苏糖醇（Dithiothreitol，简称为DTT）



CAS号 3483-12-3
PubChem 446094
SMILES SC[C@@H](O)[C@H](O)CS



DTT是一种小分子有机还原剂。其还原状态下为线性分子，被氧化后变为包含二硫键的六元环状结构。二硫苏糖醇的名字衍生自苏糖（一种四碳单糖）。DTT的异构体为Dithioerythritol（DTE），即DTT的氧化结构。

DTT是一种很强的还原剂，其还原性很大程度上是由于其氧化状态六元环（含二硫键）的构象稳定性。它的氧化还原电势在pH为7时为-0.33伏。二硫苏糖醇对一个典型的二硫键的还原是由两步连续的巯基-二硫键交换反应所组成。

其中，第一步反应所形成的中间态很不稳定，因为DTT上的第二个巯基趋向于与被氧化的硫原子连接，使中间态很快被转化为DTT的环状氧化结构，从而完成对二硫键的还原。

DTT的还原力受pH值的影响，只在pH值大于7的情况下能够发挥还原作用。这是因为只有脱去质子的硫醇盐负离子（-S–）才具有反应活性，硫醇（-SH）则没有；而巯基的pKa一般为～8.3。



DTT的用途之一是作为巯基化DNA的还原剂和去保护剂。巯基化DNA末端硫原子在溶液中趋向于形成二聚体，特别是在存在氧气的情况下。这种二聚化大大降低了一些偶联反应实验（如DNA在生物感应器中的固定）的效率；而在DNA溶液中加入DTT，反应一段时间后除去，就可以降低DNA的二聚化。

DTT也常常被用于蛋白质中二硫键的还原，可用于阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键(能够保护正常晶体蛋白所含的半胱氨酸等成分不受氧化修饰，减少其变性可能性)。但DTT往往无法还原包埋于蛋白质结构内部（溶剂不可及）的二硫键，这类二硫键的还原常常需要先将蛋白质变性（高温加热或加入变性剂，如6M 盐酸胍、8M 尿素或1% SDS）。反之，根据DTT存在情况下，二硫键还原速度的不同，可以判断其包埋程度的深浅。
=============================回答=================================
巯基保护试剂如DTT、巯基乙醇对酶活力有显著的激活作用，但是同时DTT可以逆转激活作用,因为它同时也是蛋白质变性剂，破坏二硫键。变性目的蛋白,破坏二硫键能帮助打开蛋白质的二硫键，使待分析的蛋白质分离成为单一的蛋白亚基。DTT是一种硫醇还原剂，当其浓度达到50mM时可促进大多数蛋白的半胱氨酸残基被还原。

如何用紫外分光光度计，测量水中二甲苯的浓度（步骤）？

分光光度计要测量的样品必须是均一的溶液，不能有沉淀，如果有沉淀的话就要摇匀。之于为什么这样做和可以做哪些测量、如何测量，下面详述:
分光光度计就是利用分光光度法对物质进行定量定性分析的仪器。
而分光光度法则是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析。 常用的波长范围为：(1)200～400nm的紫外光区,(2)400～760nm的可见光区,(3)2.5～25μm（按波数计为4000cm～400cm）的红外光区。所用仪器为紫外分光光度计、可见光分光光度计（或比色计）、红外分光光度计或原子吸收分光光度计。为保证测量的精密度和准确度，所有仪器应按照国家计量检定规程或本附录规定，定期进行校正检定。 单色光辐射穿过被测物质溶液时，被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的厚度（光路长度）成正比，其关系如下式： 1 A=log — =ECL T 式中 A 为吸收度； T 为透光率； E 为吸收系数，采用的表示方法是(E1％ 1cm),即吸收度换算成溶液浓度为1％(g/ml)，液层厚度为1cm的数值； C 为100ml溶液中所含被测物质的重量，g(按干燥品或无水物计算）； L 为液层厚度 ，cm。 物质对光的选择性吸收波长，以及相应的吸收系数是该物质的物理常数。当已知某纯物质在一定条件下的吸收系数后,可用同样条件将该供试品配成溶液，测定其吸收度,即可由上式计算出供试品中该物质的含量。在可见光区，除某些物质对光有吸收外，很多物质本身并没有吸收,但可在一定条件下加入显色试剂或经过处理使其显色后再测定,故又称比色分析。由于显色时影响呈色深浅的因素较多，且常使用单色光纯度较差的仪器，故测定时应用标准品或对照品同时操作。
分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。
分光光度计的简单原理
分光光度计计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。
核酸的定量
核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波长260 nm。每种核酸的分子构成不一，因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸，事先要选择对应的系数。如：1OD 的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。测试后的吸光值经过上述系数的换算，从而得出相应的样品浓度。测试前，选择正确的程序，输入原液和稀释液的体积，尔后测试空白液和样品液。然而，实验并非一帆风顺。读数不稳定可能是实验者最头痛的问题。灵敏度越高的仪器，表现出的吸光值漂移越大。
事实上，分光光度计的设计原理和工作原理，允许吸光值在一定范围内变化，即仪器有一定的准确度和精确度。如Eppendorf Biophotometer的准确度≤1.0%（1A）。这样多次测试的结果在均值1.0%左右之间变动，都是正常的。另外，还需考虑核酸本身物化性质和溶解核酸的缓冲液的pH值，离子浓度等：在测试时，离子浓度太高，也会导致读数漂移，因此建议使用pH值一定、离子浓度较低的缓冲液，如TE，可大大稳定读数。样品的稀释浓度同样是不可忽视的因素：由于样品中不可避免存在一些细小的颗粒，尤其是核酸样品。这些小颗粒的存在干扰测试效果。为了最大程度减少颗粒对测试结果的影响，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值最好在0.1-1.5A。在此范围内，颗粒的干扰相对较小，结果稳定。从而意味着样品的浓度不能过低，或者过高（超过光度计的测试范围）。最后是操作因素，如混合要充分，否则吸光值太低，甚至出现负值；混合液不能存在气泡，空白液无悬浮物，否则读数漂移剧烈；必须使用相同的比色杯测试空白液和样品，否则浓度差异太大；换算系数和样品浓度单位选择一致；不能采用窗口磨损的比色杯；样品的体积必须达到比色杯要求的最小体积等多个操作事项。
除了核酸浓度，分光光度计同时显示几个非常重要的比值表示样品的纯度，如A260/A280的比值，用于评估样品的纯度，因为蛋白的吸收峰是280nm。纯净的样品，比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A230表示样品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0。A320检测溶液的混浊度和其他干扰因子。纯样品，A320一般是0。
蛋白质的直接定量（UV法）
这种方法是在280nm波长，直接测试蛋白。选择Warburg 公式，光度计可以直接显示出样品的浓度，或者是选择相应的换算方法，将吸光值转换为样品浓度。蛋白质测定过程非常简单，先测试空白液，然后直接测试蛋白质。由于缓冲液中存在一些杂质，一般要消除320nm 的“背景”信息，设定此功能“开”。与测试核酸类似，要求A280的吸光值至少大于0.1A，最佳的线性范围在1.0-1.5 之间。实验中选择Warburg 公式显示样品浓度时，发现读数“漂移”。这是一个正常的现象。事实上，只要观察A280的吸光值的变化范围不超过1%，表明结果非常稳定。漂移的原因是因为Warburg 公式吸光值换算成浓度，乘以一定的系数，只要吸光值有少许改变，浓度就会被放大，从而显得结果很不稳定。蛋白质直接定量方法，适合测试较纯净、成分相对单一的蛋白质。紫外直接定量法相对于比色法来说，速度快，操作简单；但是容易受到平行物质的干扰，如DNA的干扰；另外敏感度低，要求蛋白的浓度较高。
比色法蛋白质定量
蛋白质通常是多种蛋白质的化合物，比色法测定的基础是蛋白质构成成分：氨基酸（如酪氨酸，丝氨酸）与外加的显色基团或者染料反应，产生有色物质。有色物质的浓度与蛋白质反应的氨基酸数目直接相关，从而反应蛋白质浓度。
比色方法一般有BCA，Bradford，Lowry 等几种方法。
Lowry 法：以最早期的Biuret 反应为基础，并有所改进。蛋白质与Cu2 反应，产生蓝色的反应物。但是与Biuret 相比，Lowry 法敏感性更高。缺点是需要顺序加入几种不同的反应试剂；反应需要的时间较长；容易受到非蛋白物质的影响；含EDTA，Triton x-100，ammonia sulfate 等物质的蛋白不适合此种方法。
BCA（Bicinchoninine acid assay）法：这是一种较新的、更敏感的蛋白测试法。要分析的蛋白在碱性溶液里与Cu2 反应产生Cu ，后者与BCA形成螯合物，形成紫色化合物，吸收峰在562nm波长。此化合物与蛋白浓度的线性关系极强，反应后形成的化合物非常稳定。相对于Lowry法，操作简单，敏感度高。但是与Lowry法相似的是容易受到蛋白质之间以及去污剂的干扰。
Bradford 法：这种方法的原理是蛋白质与考马斯亮兰结合反应，产生的有色化合物吸收峰595nm。其最大的特点是，敏感度好，是Lowry 和BCA 两种测试方法的2 倍；操作更简单，速度更快；只需要一种反应试剂；化合物可以稳定1小时，方便结果；而且与一系列干扰Lowry，BCA 反应的还原剂（如DTT，巯基乙醇）相容。但是对于去污剂依然是敏感的。最主要的缺点是不同的标准品会导致同一样品的结果差异较大，无可比性。
某些初次接触比色法测定的研究者可能为各种比色法测出的结果并不一致，感到迷惑，究竟该相信哪种方法？由于各种方法反应的基团以及显色基团不一，所以同时使用几种方法对同一样品得出的样品浓度无可比性。例如：Keller等测试人奶中的蛋白，结果Lowry，BCA 测出的浓度明显高于Bradford，差异显著。即使是测定同一样品，同一种比色法选择的标准样品不一致，测试后的浓度也不一致。如用Lowry测试细胞匀浆中的蛋白质，以BSA作标准品，浓度1.34mg/ml，以a球蛋白作标准品，浓度2.64mg/ml。因此，在选择比色法之前，最好是参照要测试的样本的化学构成，寻找化学构成类似的标准蛋白作标准品。另外，比色法定量蛋白质，经常出现的问题是样品的吸光值太低，导致测出的样品浓度与实际的浓度差距较大。关键问题是，反应后1011分光光度计的重要配件—— 比色杯的颜色是有一定的半衰期，所以每种比色法都列出了反应测试时间，所有的样品（包括标准样品），都必须在此时间内测试。时间过长，得到的吸光值变小，换算的浓度值降低。除此，反应温度、溶液PH值等都是影响实验的重要原因。此外，非常重要的是，最好是用塑料的比色法。避免使用石英或者玻璃材质的比色杯，因为反应后的颜色会让石英或者玻璃着色，导致样品吸光值不准确。
细菌细胞密度（OD 600）
实验室确定细菌生长密度和生长期，多根据经验和目测推断细菌的生长密度。在遇到要求较高的实验，需要采用分光光度计准确测定细菌细胞密度。OD600是追踪液体培养物中微生物生长的标准方法。以未加菌液的培养液作为空白液，之后定量培养后的含菌培养液。为了保证正确操作，必须针对每种微生物和每台仪器用显微镜进行细胞计数，做出校正曲线。实验中偶尔会出现菌液的OD值出现负值，原因是采用了显色的培养基，即细菌培养一段时间后，与培养基反应，发生变色反应。另外，需要注意的是，测试的样品不能离心，保持细菌悬浮状态。
分光光度计的重要配件—— 比色杯
比色杯按照材质大致分为石英杯、玻璃杯以及塑料杯。根据不同的测量体积，有比色杯和毛细比色杯等。一般测试核酸和紫外定量蛋白，均采用石英杯或者玻璃杯，但是不适合比色法测定。因为反应中的染料（如考马斯亮兰）能让石英和玻璃着色，所以必须采用一次性的塑料杯。而塑料杯一般不适合用于在紫外范围内测试样品。
由于另外测试的样品量不同，所以一般分光光度计厂家提供不同容积的比色杯以满足用户不同的需求。目前市场已经存在一种既可用于核酸、紫外蛋白质定量，亦可用于蛋白比色法测定的塑料杯，样品用量仅需50μl，比色杯单个无菌包装，可以回收样品。如Eppendorf UVette塑料比色杯，是目前比色杯市场上一个革新。随着生命科学以及相关学科发展，对此类科学的实验研究提出更高的要求，分光光度计将是分子生物学实验室不可缺少的仪器，也成为微生物、食品、制药等相关实验室的必备设备之一。
随着科技的发展，现在比色杯已经不是使用分光光度计时的必备物品。目前国外Nanodrop公司（现已被Thermo Fisher公司收购）生产的ND1000分光光度计与旧式分光光度计相比，已经可以做到无需稀释样品，无需使用比色杯，每次测量仅需1-2μl样品即可完成测量。

我想写一篇关于大肠杆菌的论文，字数1500左右，应该从那些方面入手去写

　　0引言

　　脆性X综合征（fragile X syndrome, FXS）是一种最常见的遗传性智力发育不全综合征，有超过99%的FXS是由脆性X智障基因1（fragile X mental retardation, FMR1）中5′端非编码区CGG三核苷酸重复序列不稳定扩增及其CpG岛异常甲基化导致. FMR1基因的表达产物FMRP的缺乏导致FXS的发生［1-2］. 本实验对编码基因存在于3号染色体［3］，能与FMR1 基因5′ d (CGG)n3′重复序列特异性结合的蛋白CGGBP1进行原核表达，并对其DNA结合活性进行研究.

　　1材料和方法
　　1.1材料

　　大肠杆菌DH5α, BL21（ DE3）和表达载体pRSET A均为本实验室保存. 质粒提取试剂盒购自Sigma公司； 限制性内切酶BamH I和KpnI购自宝生物工程公司；T4 DNA连接酶购自Promega公司； Ni2+NTA金属螯合蛋白质纯化系统购自Qiagen公司；链酶亲和素磁珠购自Dynal公司；低分子质量蛋白标准购自上海西巴斯生物技术有限公司.

　　1.2方法

　　1.2.1表达载体的构建

　　根据CGGBP1基因起始密码子和终止子邻近序列设计PCR引物：CGGBP1F CGC GGA TCC GAG CGA TTG TAG TAA CAG CA，CGGBP1R GGG GTA CCT CAA CAA TCT TGT GAG TTG AG. 其上游及下游引物分别加入BamHI和KpnI酶切识别位点序列(引物序列下划线部分). PCR反应以人淋巴细胞cDNA文库为模板，扩增编码CGGBP1的基因序列. 设计PCR扩增体系25 μL，灭菌去离子水10 μL，10×反应缓冲液2.5 μL，25 mmol/L MgCl2 2.0 μL，DMSO 2.5 μL，4× dNTP混合物（每种2.5 mmol/L）2 μL，CGGBP1F和CGGBP1R各10 pmol，模板3.5 μL（50 ng/μL）， Taq DNA（5 μ/μL）聚合酶0.5 μL. 扩增条件：95℃预变性5 min，再94℃ 30 s， 53℃ 1 min，72℃ 1 min循环40次，最后72℃终末延伸产物10 min. PCR产物经琼脂糖电泳分离，用胶回试剂盒回收目的基因. 用BamHI和KpnI酶切PCR产物和pRSET A，酶切产物电泳后回收，在T4连接酶作用下，目的片段定向克隆至pRSET A的BamHI和KpnI克隆位点. 将重组质粒转入大肠杆菌DH5α，接种到含氨苄青霉素的LB培养基平板并挑取单菌落.

　　1.2.2融合蛋白的诱导表达

　　将测序正确的重组质粒转入BL21（ DE3）. 挑取携带目标质粒的单菌落接种于含100 mg/L氨苄青霉素的LB培养基中， 37℃振荡培养12 h， 按10 mL/L比例转接于新鲜培养基，37℃振荡培养至对数生长期时，加入IPTG至终浓度1 mmol/L，32℃诱导振荡培养4 h，离心收集菌体，SDSPAGE分析重组蛋白的表达.

　　1.2.3蛋白表达形式的分析

　　取5 mL菌液离心，用500 μL的裂解液（10 mmol/L 咪唑，300 mmol/L NaCl及50 mmol/L磷酸二氢钠 pH 8.0）重悬，加溶菌酶至终浓度为1 mg/mL，冰浴30 min，超声波裂菌，离心后分别将上清和沉淀进行SDSPAGE分析.

　　1.2.4融合蛋白的纯化

　　将1 mL 500 mL/L Ni2+NTA悬液和4 mL细菌裂解上清液轻轻混匀4℃放置60 min，直接过柱. 过柱结束后，用4 mL漂洗液（20 mmol/L 咪唑，300 mmol/L NaCl及50 mmol/L 磷酸二氢钠 pH 8.0），洗脱未和Ni珠结合的杂蛋白. 经过2次漂洗后再用0.5 mL洗脱液(250 mmol/L 咪唑，300 mmol/L NaCl及50 mmol/L 磷酸二氢钠 pH 8.0) 3次洗脱特异结合的目的蛋白，分步收集. 取收集液，进行SDSPAGE分析.

　　1.2.5CGGBP1与（CGG）29重复序列双链DNA结合

　　实验取10 μL磁珠用1 mL的无RNA酶的三蒸水清洗磁珠2次，除去防腐剂. 1×生物素亲和素结合缓冲液（10 mmol/L TrisHCl，2 mol/L NaCl，1 mmol/L EDTA，1 g/L Tween 20）15 μL重悬磁珠，各5 μL分3组实验. 其中一组加入25 μL（100 ng/μL）生物素化的（CGG）29重复序列双链DNA，另外两组分别加入25 μL（100 ng/μL）非生物素化的（CGG）29重复序列双链DNA和25 μL三蒸水做对照；三组分别再加入2×生物素亲和素结合缓冲液30 μL，25℃轻摇1 h. 经磁力吸附后，弃上清. 重复上述步骤3次；加入纯化后CGGBP1（500 μg/mL）15 μL 和2×核酸蛋白结合缓冲液（20 mmol/L HEPES，100 mmol/L NaCl，0.5 mmol/L DTT，100 g/L甘油）20 μL，室温下静置30 min；经磁力吸附后，弃上清；用1×核酸蛋白结合缓冲液清洗磁珠2次；加三蒸水10 μL，沸水煮10 min，进行SDSPAGE分析.

　　2结果

　　2.1原核表达载体的构建及鉴定

　　扩增产物在15 g/L的琼脂糖凝胶电泳，可观察到一条约504 bp的条带（图1）； 重组质粒pRSET A/CGGBP1及质粒pRSET A分别用BamHI和KpnI酶切，pRSET A/CGGBP1分为两个片段，分别为2.9 ku和504 bp（图2），均与预计结果相同.




　　2.2CGGBP1的表达

　　用BamHI和KpnI双酶切pRSET A/CGGBP1表达质粒，筛选阳性重组质粒. 携带有pRSET A/CGGBP1质粒的E.coli BL21(DE3)菌株，经IPTG诱导后，在Mr 约25 000处出现1条表达条带；而未经IPTG诱导的菌体则无此条带. 诱导后的菌体经溶菌酶及超声波裂解，离心后分为上清和沉淀两部分. 经SDSPAGE分析表明，CGGBP1部分存在于细菌裂解液的上清中，为可溶性蛋白，上清液中的目标蛋白相对较少（图3）.

　　2.3CGGBP1蛋白纯化

　　在表达质粒pRSET A多克隆酶切位点的上游， 插入有连续6个组氨酸的序列 —(His )6 tag. 重组质粒经诱导表达后，(His )6 tag可以和外源插入片段共同表达. 利用(His )6 tag 和金属Ni2+的螯合所设计的固定化金属配体亲和柱层析方法，是纯化目的蛋白的一种高效而简单的方法. SDSPAGE显示，CGGBP1得到较高程度的纯化（图4）.

　　2.4CGGBP1与5′d（CGG）293′重复序列

　　双链DNA结合实验生物素化的5′d（CGG）29 3′重复序列双链DNA被固定到链酶亲和素磁珠上，非生物素化的5′d（CGG）293′重复序列双链DNA因无法固定到链酶亲和素磁珠上而被洗脱掉. 同理，加入CGGBP1后，未和5′d (CGG）293′重复序列双链DNA结合的蛋白也被洗脱（图5）.

　　3讨论

　　关于微卫星的产生机制，普遍认为是DNA复制过程中DNA聚合酶的滑动［4］，或DNA复制和修复时滑动链与互补链碱基错配，导致一个或几个重复单位的插入或缺失. 已发现微卫星可能是一种非常活跃的碱基序列，通常各种简单的重复序列成簇地聚集在一个染色体区域，这个染色体区形成特异染色体结构的能力将会增强. 这些区域在核糖体RNA基因中非常复杂，同时这些重复序列所折叠形成的结构还能与特异的蛋白质相结合，成为“染色质折叠密码”［5-6］，参与遗传物质的结构改变，基因调控及细胞分化等过程. 脆性X综合征是Igarashi等［7］研究报道的与三核苷酸重复片段扩增突变有关的7种神经变性疾病其中的一种. 该蛋白只和（CGG）n重复序列发生特异性结合，而与其它类型的三核苷酸重复序列不结合［8］. 因此，对该蛋白功能的研究具有重要的理论研究意义.
　　
　　本实验成功地构建了含CGGBP1的重组质粒，以可溶性蛋白形式获得较高表达. 通过Ni2+NTA柱纯化，获得纯化的目标融合蛋白质，同时证明了该蛋白能和人FMR1基因5′d (CGG)293′重复序列双链DNA特异性结合. 这将为进一步开展真核生物蛋白CGGBP1功能的研究和阐释CGG三核苷酸动态突变的致病机理奠定基础.

100单位加2.5毫升盐水稀释,每0.1ml多少

0.1mL中含有4单位

DTT作用是什么DTT的作用是什么

DTT为常用还原剂,
有抗氧化作用.它能保护酶分子上的还原性基团,
维持还原性环境,稳定酶的活性.

外贸中的DTT什么意思

你把真个句子都搬上来或许能帮的上你！

SDS电泳中 没有被DTT打开的是什么

SDS是阴离子去污剂，作为变性剂和助溶试剂，它能断裂分子内和分子间的氢键，使分子去折叠，破坏蛋白分子的二、三级结构。而强还原剂如巯基乙醇，二硫苏糖醇(DTT)能使半胱氨酸残基间的二硫键断裂。
题目不明确。加入DTT后，蛋白质变性并成为单个的亚基，此时只有各个氨基酸之间的酰胺键是连接的。所以应该是酰胺键。

生化试验中永的DTT、PTU是什么意思

二硫苏糖醇(DTT)
丙基硫氧嘧啶(PTU)

双向电泳水化液配方: 8M Urea, 1%DTT, 2%CHAPS, 0.5%微升两性电解质。配制50ml，固体应称量多少克？

urea就按照50mL 中8M的浓度来算（分子量等）
DTT 和CHAPS一般是mM的浓度吧？如果是1%的话就应该按照100mL 对应1g的标准来算了。

含尿素，硫脲，dtt和chaps的蛋白裂解液4度可以存放多久

裂解液(10mL):7mol/L尿素，4.2g;2mol/L硫脲，1.522g;4% CHAPS，0.4g;50mmol/L DTT，0.075g;0.5% CA(两性电解质)，125微升;100mm PMSF，100微升;DDH2O定容至10mL

dtt能再次把烷基化化的多肽蛋白还原吗

有还原烷基化蛋白质消化操作流程


1. 将所选择的胶点用1.5mm切胶笔切下，置于eppendorf (EP) 管或96孔PCR板
中,并记录点号及相应的位置；
2. 加50μL DD.H2O 洗两次，10min/次；
3. 加50 mM NH4HCO3/乙腈=1：1溶液50μL，超声脱色5min或37℃脱色20min，
吸干；
4. 重复步骤3，直至蓝色褪去；
5. 加乙腈50μL脱水至胶粒完全变白，真空抽干5min；
6. 加10 mM 二硫苏糖醇DTT（10μL 1M DTT，990μL 25mM NH4HCO3配制） 20
μL，56℃水浴1hr；（1.54mg/ml）
7. 冷却到室温后，吸干，快速加55 mM 碘代乙酰胺IAM （55μL 1M IAM，945
μL 25mM NH4HCO3配制）20μL，置于暗室45min； （10.2mg/ml）
8. 依次用25 mM NH4HCO3、50％乙腈溶液和乙腈洗，乙腈脱水到胶粒完全变白为
止，真空抽干5min；
9. 将0.1μg/μL的trypsin酶储液以25 mM NH4HCO3稀释10倍，每EP管加2μL，
稍微离心一下，让酶液充分与胶粒接触，4℃或冰上放置30min，待溶液被胶块完全吸收，加25mM NH4HCO3 10-15μL置37℃，消化过夜；
10. 加入2%TFA（三氟乙酸）终止反应，使TFA终浓度为0.1％，振荡混匀，离心。

说明:
1.每加一次溶液都要漩涡振荡，胶粒要完全浸没在溶液中，进行下一步操作前要把溶液吸走。
2．如果胶粒超过1.5mm3,把胶粒分成约为1.5mm3大小再进行脱色，使用的各种溶液的量也相应增加。
3．实验过程中一定要注意使用的溶液和器具的洁净，防止角蛋白污染，并戴口罩和帽子。
4．银染蛋白质点胶内消化不要脱色，步骤3、4省略, 如果需要脱色，使用100mM Na2S2O3与30mM K3Fe（CN）6 1：1混合溶液，脱色后用水洗到胶颜色透明为止。

需要准备的试剂：
乙腈，碳酸氢铵，DTT，IAM，trypsin，TFA，水
Digest SOP
双向电泳考染点无还原烷基化胶内消化操作流程

1．将所选择的胶点用1.5mm切胶笔切下，置于eppendorf (EP) 管或96孔PCR板
中, 并记录点号及相应的位置；
2．加30μL DD.H2O 洗两次，10min/次；
3． 加50 mM NH4HCO3/乙腈=1：1溶液30μL，超声脱色5min或37℃脱色20min，吸干；
4．重复步骤3，直至蓝色褪去；
5．加乙腈30μL脱水至胶粒完全变白，真空抽干5min；
6．将0.1μg/μL的酶储液以25 mM NH4HCO3稀释10倍，每EP管加2μL，稍微离心一下，让酶液充分与胶粒接触，4℃或冰上放置30min，待溶液被胶块完全吸收，加25mM NH4HCO3 10-15μL置37℃，消化过夜；
7．加入2%TFA终止反应，使TFA终浓度为0.1％，振荡混匀，离心。

说明:
1. 每加一次溶液都要漩涡振荡，胶粒要完全浸没在溶液中，进行下一步操作前要把溶液吸走。
2．如果胶粒超过1.5mm3,把胶粒分成约为1.5mm3大小再进行脱色，使用的各种溶液的量也相应增加。
3．实验过程中一定要注意使用的溶液和器具的洁净，防止角蛋白污染，并带口罩和帽子。
Digest SOP
全蛋白溶液消化操作规程

一、 试剂：
1．变性缓冲液：6M Guanidine-HCl，50mM Tris-HCl,(pH8.0)或6-8M 尿素，50mM
Tris-HCl,(pH8.0)
2．1M DTT
3．1M IAM
4．50mM NH4HCO3(pH7.8)
5．Trypsin酶
二、 操作步骤：
1．将蛋白溶解于6M Guanidine-HCl或6-8M 尿素或0.1% SDS, 50mM
Tris-HCl,(pH8.0);
2．往溶液中加入1M DTT至终浓度2-5mM;
3．95℃加热15-20min或者60℃加热45-60min，冷却至室温；
4．加入1M IAM至终浓度10-25mM，室温暗处孵育45min；
5．加入50mM NH4HCO3(pH7.8)稀释Guanidine-HCl或尿素至终浓度不超过1M；
6．按Trypsin酶与底物蛋白的量之比在1：20-1：100之间，加入酶液，37℃孵
育8-12Hr;
7．再次加入同等剂量的Trypsin酶溶液，室温孵育24Hr；
8．加入2%的甲酸（FA）到终浓度0.1%终止反应；
9．浓缩样品到合适的体积。

注意事项：
1．样品中避免存在以下常见的胰蛋白酶抑制剂
Antipain (50µg/ml), antithrombin (1unit/ml), APMSF (0.01–0.04mg/ml), aprotinin
(0.06–2µg/ml), leupeptin (0.5µg/ml), PMSF (17–170µg/ml), TLCK (37–50µg/ml),
trypsin inhibitors (10–100µg/ml).
Digest SOP
SDS-PAGE蛋白质条带消化操作流程

1. 将所选择的胶条用手术刀片切下，置于eppendorf (EP) 管中,并记录条带号及相
应的位置；
2. 把条带切成2mm3大小；
3. 加200μL DD.H2O 洗两次，10min/次；
4. 加50 mM NH4HCO3/乙腈=1：1溶液200μL，超声脱色5min或37℃脱色20min，
吸干；
5. 重复步骤4，直至蓝色褪去；
6. 加乙腈200μL脱水至胶粒完全变白，真空抽干5min；
7. 加10 mM DTT（10μL 1M DTT，990μL 25mM NH4HCO3配制） 50μL，56℃
水浴1hr； (10mM DTT 1.54mg/ml)
8. 冷却到室温后，吸干，快速加55 mM IAM （55μL 1M IAM，945μL 25mM
NH4HCO3配制）50μL，置于暗室45min； (55mM IAM 10.2mg/ml)
9. 依次用25 mM NH4HCO3、50％乙腈溶液和乙腈洗，乙腈脱水到胶粒完全变白为
止，真空抽干5min；
10. 将0.1μg/μL的酶储液以25 mM NH4HCO3稀释10倍，每EP管加40μL，稍微
离心一下，让酶液充分与胶粒接触，4℃或冰上放置30min，待溶液被胶块完全吸收，吸走多余的酶液，加25mM NH4HCO3 30-45μL置37℃，消化过夜；
11. 加入2%甲酸FA终止反应，使FA终浓度为0.1％，振荡混匀，离心；
12. 取出溶液转到新的EP管，加50ul 60%ACN含0.1%FA的溶液超声20min萃取，
合并溶液；
13. 溶液真空干燥；
14. 加入0.1%FA的水溶液20ul溶解多肽。

说明:
1.每加一次溶液都要漩涡振荡，胶块要完全浸没在溶液中，进行下一步操作前要把溶液吸走。
2．实验过程中一定要注意使用的溶液和器具的洁净，防止角蛋白污染，并带口罩和帽子。
3. 酶液不要反复冻融。
4. 银染不用脱色，可以减少第4，第5步，如果想要脱色，可以用30mM K3Fe(CN)6与100mM的溶液1：1混合，银颜色褪去后，用25mM NH4HCO3溶液洗到胶颜色透明，
接着第6步。
5. 如果用MALDI检测，第14步加入0.1%TFA的水溶液5-10ul溶解多肽。

20%NaN3溶液高压会危险吗

没有,只要含有水.别说是20%,90%也没有问题啊.
如一般用的分析纯硝酸铵,因为里面含有结晶水,所以爆炸的危险性也极小...
硝酸铵其实不是像文献里面描写的那样易爆的.

提取的蛋白怎么降低dtt的浓度

因为有些蛋白有半胱氨酸的存在，所以会形成很多-SH键来维持蛋白质的高级结构
又因为-SH键具有很强的还原性，为了避免-SH被氧化而造成蛋白失去活性，所以需要加入DTT来保护-SH键不被还原掉。但是DTT量太高的话又会破坏掉二硫键。

也就是说DTT浓度太低起不到保护作用，浓度太高又会破坏结构。所以如果一些蛋白需要添加的话一般是建议在0.5mM~1.5mM之间。

DTT在多少浓度下可以打开分子间二硫键

DTT是一种硫醇还原剂，当其浓度达到50mM时可促进大多数蛋白的半胱氨酸残基被还原。
一般1-2mM起到保护蛋白－SH的作用，10mM以上就可以破坏已经形成的二硫键。

蛋白中的DTT怎么去除

因为有些蛋白有半胱氨酸的存在，所以会形成很多-SH键来维持蛋白质的高级结构
又因为-SH键具有很强的还原性，为了避免-SH被氧化而造成蛋白失去活性，所以需要加入DTT来保护-SH键不被还原掉。但是DTT量太高的话又会破坏掉二硫键。

也就是说DTT浓度太低起不到保护作用，浓度太高又会破坏结构。所以如果一些蛋白需要添加的话一般是建议在0.5mM~1.5mM之间。

DTT作用是什么

DTT作用如下：
1、DTT的作用之一是作为巯基化DNA的还原剂和去保护剂。巯基化DNA末端硫原子在溶液中趋向于形成二聚体，特别是在存在氧气的情况下。这种二聚化大大降低了一些偶联反应实验（如DNA在生物感应器中的固定）的效率；而在DNA溶液中加入DTT，反应一段时间后除去，就可以降低DNA的二聚化。
2、DTT也常常被用于蛋白质中二硫键的还原，可用于阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键。但DTT往往无法还原包埋于蛋白质结构内部（溶剂不可及）的二硫键，这类二硫键的还原常常需要先将蛋白质变性（高温加热或加入变性剂，如6M盐酸胍、8M尿素或1%SDS）。反之，根据DTT存在情况下，二硫键还原速度的不同，可以判断其包埋程度的深浅。

DTT即DL-Dithiothreitol，中文名为二硫苏糖醇。分子式为C4H10O2S2，分子量为154.25，纯度>99%。常用还原剂，有抗氧化作用，进口分装。DTT和巯基乙醇相比，作用相似，但DTT的刺激性气味要小很多，毒性也比巯基乙醇低很多。而且DTT比巯基乙醇的浓度低7倍时，两者效果相近，但DTT价格略高一些。

急求：关于EMSA实验中纯蛋白溶剂的问题！

1. 避免缓冲液中有高浓度的电子供体基团，比如:NH4，甘氨酸，精氨酸，Tris，等等; 2. 各种缓冲液中不能有强螯合剂，如EDTA，EGTA，等等; 3. 各种缓冲液里不能有高浓度的强还原剂，，比如DTT，防止二价Ni被还原; 4. 不能含离子型的去垢剂，比如SDS，防止Ni流失; -1mM的PMSF，防止目的5. 在破碎细胞的时候建议加入蛋白酶抑制剂，比如0.1 蛋白被降解; 6. 缓冲液里可以加入甘油，防止蛋白之间由于疏水相互作用而发生聚集沉淀，甘油浓度最高可达50%(v/v) 7. 应避免含碳酸氢钠，柠檬酸等物质; 8. 缓冲液里NaCl的浓度应在300mM到2M之间; 9. 可加入变性剂促溶，盐酸胍(最高可6M)，尿素(最高可8M) 10.可加入非离子型去垢剂，如Triton，Tween，NP40等，最高2%，可以减少背景蛋白污染和去除核酸污染 组氨酸标签蛋白的纯化

样品做表面拉曼增强能放几天?是金属对DTTCI的增强，如果放了一天半，再去测，会有哪些影响因素啊？

一般不能长时间放有

有哪些养生的小常识？

有哪些你必须知道的健康养生小常识呢？

养生保健小知识有哪些?谢谢

养生小知识你知道多少呢？

生活小常识：怎样养生

养生小常识： 1、偏于气虚的人，可多选一些健脾益气的食物煲汤，如红薯、山药、土豆、鸡蛋、鹌鹑蛋、鸡肉、鹌鹑肉、牛肉、瘦猪肉、鲜鱼、花生、芝麻、大枣、栗子等。 2、偏于气阴不足的人，可选一些益气养阴的食物来煲汤，如胡萝卜、豆芽、豆腐、莲藕、荸荠、百合、银耳、蘑菇、鸭蛋、鸭肉、兔肉、蛙肉、龟肉、甲鱼等。 3、初秋之时，食物宜减辛增酸，以养肝气。古代医学家认为，秋季，草木零落，气清风寒，人体容易受疾病的侵扰，所以此时宜进食滋补的食物。 4、中秋炎热，气候干燥，容易疲乏。此时应多吃新鲜少油的食品，其次，还应多吃含维生素和蛋白质较多的食物。现代医学认为，秋燥症应多食含维生素A、B族维生素、维生素C、维生素E类营养素的食物，如胡萝卜、藕、梨、蜂蜜、芝麻、木耳等。 5、秋天宜收不宜散，因此秋季煲汤宜多选甘寒滋润之品，如百合、银耳、山药、秋梨、藕、鸭肉、柿子、芝麻等。 扩展资料： 1、现代医学认为，秋燥症应多食含维生素A、B族维生素、维生素C、维生素E类营养素的食物，如胡萝卜、藕、梨、蜂蜜、芝麻、木耳等，以养血润燥，从而提高抗秋燥、抗病毒的能力。 2、根据中医“虚则补之，寒则温之”的原则，同时因人们的年龄、性别、职业等差异很大，在选择冬季进补的方案时，应因人而异。如形体偏瘦、性情急躁、易于激动者，应以“淡补”为主，采用滋阴增液、养血生津的食材煲汤，禁用辛辣等食物。 参考资料：百度百科-养生

冬季养生小常识大全

冬天是生机潜伏闭藏的季节，是一年的结束，亦是下一年的开始，所谓“春生，夏长，秋收，冬藏”，因此做好冬季养生对来年的健康至关重要。冬季养生应该从“不”开始。具体如下： 1、不妄补 很多人认为冬季是一个进补的黄金季节，在冬季到来时各种补品大量食用，也有不少商家为了迎合消费者的需求推出了各种“套餐”“搭档”。其实冬季适当进补就行，冬季主要在于闭藏，不是外泄。 过量进补反而会导致身体平衡被打破而形成病态，尤其是过量使用补阳、补气之品反而导致体内精气的外泄，造成“冬不藏精”。所以冬季应该适当进补，不可妄补，尤其是人参、鹿茸等这样的补气、补阳“利器”更应慎重。 2、不妄吃 冬季天寒地冻，吃上一顿麻辣火锅，出上一身汗，好多人会感到很舒服，殊不知这是在耗散人体的阳气。在冬季应该以补养阴精为主，切不可妄用大热之品。当然在冬季更不能吃一些寒凉之品，以免损伤脾阳，影响脾胃运化，破坏消化系统。 总之，在冬季应以平和而滋润的饮食为主，如多喝一些粥类，适当放一些大枣、枸杞子、桂圆、银耳、百合，酌加少量生姜，可以补而不腻，润而不燥，为冬季进补之佳品。禁忌大量大热之品如羊肉、辣椒等，大量大寒之品如水果、冰激凌等。 扩展资料： 3、不妄喝 在冬季很多人都喜欢喝点白酒暖暖身，其实适量饮酒是有益健康的，可以温通血脉、祛风散寒，产后常用方生化汤就是以白酒煎服。但是白酒毕竟属于温热之品，过度饮用会耗散人体阳气，另外过量饮酒还会生湿生痰，令人痰多、眩晕以及精神不振。 4、 不妄作劳 冬季不应该熬夜，要早睡晚起，保证充足的睡眠时间，以利阳气潜藏，阴精积蓄。冬气之应，养藏之道，在冬季锻炼身体应当适当，不能像其他季节一样挥汗如雨，微微出汗即可；在冬季应该适当减少洗澡的次数，更不能长时间泡热水澡，经常洗桑拿，以免耗散人体阳气； 同时在冬季应该注意节制房事，调养生息，使精气藏。 参考资料来源：人民网——冬季养生从“不”开始